規(guī)?；i場(chǎng)藍(lán)耳病和偽狂犬病的控制與凈化（2022）
主要完成人：張建峰、劉志成、和彥良、馬祥、謝樂新、盧受昇、黃律、黃念、吳瑩瑩、黎少國、孫俊穎、沈海燕、張春紅、王片片、文開順
主要完成單位：廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物衛(wèi)生研究所、廣東省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、華威特（江蘇）生物制藥有限公司、廣東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)裝備研究所、勃林格殷格翰動(dòng)物保?。ㄉ虾＃┯邢薰?、佛山瑞寶動(dòng)物保健有限公司、惠州東進(jìn)農(nóng)牧股份有限公司、廣東廣寧廣三保畜牧有限公司
獲獎(jiǎng)?lì)悇e：廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院科技進(jìn)步獎(jiǎng)一等獎(jiǎng)
成果簡(jiǎn)介：
本項(xiàng)目聚焦豬藍(lán)耳病和豬偽狂犬?。ê?jiǎn)稱兩?。┚珳?zhǔn)診斷技術(shù)匱乏、疫苗種類繁多且免疫保護(hù)力比較研究缺失、凈化體系不完善等疫病凈化核心問題。
1.建立基于HRM和FMCA技術(shù)研發(fā)針對(duì)兩病疫苗株和野毒株的精準(zhǔn)分子鑒別技術(shù)，形成檢測(cè)體系，搭建精準(zhǔn)檢測(cè)研發(fā)平臺(tái)。 針對(duì)豬藍(lán)耳病、豬偽狂犬病疫苗毒株多、基因型復(fù)雜、精準(zhǔn)診斷技術(shù)匱乏的現(xiàn)狀，利用HRM和FMCA技術(shù)對(duì)核酸差異精準(zhǔn)可視化的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)了四對(duì)引物和四條探針，組合建立了豬藍(lán)耳經(jīng)典毒株、變異毒株、JXA1-R、GDr180、TJM-F92等野毒及疫苗毒株精準(zhǔn)檢測(cè)體系和豬偽狂犬歐美株、中國株及Bartha-K61疫苗毒株的分子鑒別檢測(cè)體系，前者克服了豬藍(lán)耳臨床毒株復(fù)雜和疫苗毒株多的現(xiàn)實(shí)難點(diǎn)，后者攻克了豬偽狂犬GC高、PCR擴(kuò)增難的技術(shù)難點(diǎn)，為排除疫苗株干擾開展精準(zhǔn)臨床診斷提供技術(shù)手段，解決了實(shí)際生產(chǎn)中臨床精準(zhǔn)檢測(cè)缺乏、高通量診斷難等問題。
2.研制可實(shí)現(xiàn)鑒別檢測(cè)的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗，構(gòu)建疫苗免疫防控流行毒株的保護(hù)效力比較評(píng)測(cè)體系。
篩選獲得具有Nsp2基因序列缺失360bp的特色疫苗毒株，以此作為與野毒株鑒別標(biāo)志用于臨床分子鑒別檢測(cè)和免疫抗體檢測(cè)；采用微載體懸浮培養(yǎng)技術(shù)對(duì)毒株進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)條件優(yōu)化，大大提高病毒滴度，減少細(xì)胞降解及污染的風(fēng)險(xiǎn)，該疫苗產(chǎn)品對(duì)經(jīng)典毒株、NADC30-Like毒株均有良好的交叉保護(hù)作用，無免疫干擾、效果良好?；谏唐坊呙绶N類繁多、疫苗效力比較數(shù)據(jù)缺乏的現(xiàn)狀，通過開展系統(tǒng)化動(dòng)物保護(hù)評(píng)估試驗(yàn)，構(gòu)建了疫苗免疫防控流行毒株的保護(hù)效力比較評(píng)測(cè)體系，為優(yōu)化凈化方案、優(yōu)選疫苗提供重要參考。
3.制定科學(xué)有效的“兩病”凈化控制方案，應(yīng)用于200多家規(guī)?；i場(chǎng)，效果良好。方案融合了“兩病”精準(zhǔn)分子診斷技術(shù)、疫苗免疫、抗體評(píng)測(cè)體系以及生物安全防控技術(shù)，通過政府行業(yè)部門、研究所及養(yǎng)殖企業(yè)的通力合作，“兩病”凈化示范成效顯著。16家規(guī)模化養(yǎng)殖企業(yè)獲得17個(gè)省級(jí)偽狂犬凈化場(chǎng)授牌并維持豬偽狂犬凈化狀態(tài)，3家獲得國家級(jí)豬偽狂犬凈化場(chǎng)授牌，所有34家豬藍(lán)耳病均處于控制狀態(tài)，凈化控制成效助力9家養(yǎng)殖場(chǎng)通過國家無非洲豬瘟小區(qū)驗(yàn)收。
該項(xiàng)目獲得新獸藥證書1件，生產(chǎn)批文1個(gè)，高新技術(shù)產(chǎn)品證書1個(gè)，授權(quán)國家發(fā)明專利4件（成功轉(zhuǎn)化1件），發(fā)表文章7篇（SCI 4篇）；累計(jì)培訓(xùn)技術(shù)人員11.5萬人次；“兩病”控制凈化效果顯著，推動(dòng)了全國、華南地區(qū)特別廣東省生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)高質(zhì)量發(fā)展；2019-2021年底示范推廣企業(yè)新增銷售額35.5億元，新增利潤24億元，帶動(dòng)周邊農(nóng)民就業(yè)率與收入的增長，經(jīng)濟(jì)效益顯著。